TSA法多重免疫荧光染色在猴艾滋病模型病理研究中的应用

目的:建立适合石蜡切片的多重免疫荧光染色方法和配套的定量分析算法,用以研究猕猴艾滋病(SAIDS)模型的免疫病理特征.方法:选取SIV感染猕猴和健康猕猴淋巴结的石蜡切片,以优化后的酪胺信号放大技术(TSA)进行荧光染色,通过几轮微波加热洗去前次标记抗体的方式,达到多重染色的目的.对显微图像进行粒度和灰度分析,计算每一个细胞的位置和目的蛋白的表达特征.最后图像信息被转化成数字矩阵,经R语言编程处理后用于定量分析.结果:TSA法经过优化后,切片的荧光背景信号降低而信噪比增加.荧光图像的定量分析表明,SAIDS快进展者淋巴结的CD4+细胞的感染更为严重(P<0.0001),过度浸润滤泡的CD8+细胞异常高表达颗粒酶B(P<0.0001).结论:本研究建立的TSA法多重免疫荧光染色和配套的定量分析方法是提升病理研究内容的良好技术手段,有助于AIDS及其他疾病发病机制的研究.