丁酸钠协同成纤维细胞生长因子2体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的研究

目的 探讨丁酸钠协同成纤维细胞生长因子2(FGF-2)体外诱导骨髓间充质干细胞(BMMSC)向心肌细胞分化的可行性.方法 经全骨髓贴壁法分离纯化BMMSC,进行流式细胞技术鉴定;分别加入普通完全培养基(对照组)、1 mmol/L丁酸钠培养基(丁酸钠组)、1 ng/ml FGF-2的培养基(FGF-2组)、1 mmol/L丁酸钠和1 ng/ml FGF-2的培养基(联合组)诱导培养.提取四组细胞加药诱导后1、2、4周的总RNA,通过定量反转录PCR(qRT-PCR)检测心肌特异性转录因子.运用免疫组织化学和Western blot技术,检测BMMSC诱导4周后心肌特异性蛋白的表达.结果 原代细胞培养48 h后呈圆扁形、贴壁生长,有些细胞形态已出现短梭形改变;培养1周的BMMSC进一步伸展,出现梭形、多角形和不规则形等多种形态;诱导培养4周后的BMMSC,相邻细胞间具有明显的方向性排列,一些细胞甚至成了漩涡样结构.流式细胞仪结果证明分离的细胞为纯化的BMMSC.qRT-PCR检测结果:心肌特异性基因GATA-4在诱导2周表达最强,联合组明显高于其他各组(P＜0.05).Western blot和免疫细胞化学检测结果:BMMSC经培养4周后的心脏特异性蛋白联合组高于其他各组(P＜0.05).结论 丁酸钠和FGF-2诱导BMMSC向心肌样细胞的分化,联合诱导比单独诱导效果好.