KpsF基因对烟曲霉生长的影响以及抗真菌药物作用下的生长变化

目的 KpsF基因在烟曲霉生长中的作用目前还未明确.文中旨在构建烟曲霉KpsF基因荧光定位菌株和过表达菌株,明确该基因对烟曲霉生长和在抗真菌药物作用下的生长变化情况.方法 构建烟曲霉KpsF基因敲除株(ΔKpsF)、KpsF过表达菌株.光学显微镜观察菌落特征,利用激光共聚焦显微镜观察绿色荧光在烟曲霉生长中的定位变化;采用斑点法观察菌株在抗真菌药物作用下生长变化情况.结果 同Ku80和△KpsF相比,烟曲霉KpsF基因过表达株菌落直径显著缩小(P<0.05).低倍显微镜下观察可见:△KpsF和Ku80菌丝细长,排列整齐,舒展,菌丝分支角度多为45°;而KpsF过表达菌株菌丝生长较致密,分枝繁多,且菌丝短小,分支角度相对较大.高倍显微镜下观察可见:△KpsF和Ku80的分生孢子头规整,呈短柱状,梗壁光滑;KpsF过表达菌株分生孢子头明显发育不良,孢子头欠饱满,顶囊单层小梗不清晰.激光共聚焦显微镜观察示烟曲霉孢子状态下绿色荧光弥漫分布于整个细胞中,而在菌丝状态下可见荧光在隔膜处有明显聚集.KpsF过表达株菌菌落直径分别和卡泊芬净、伊曲康唑、两性霉素B浓度呈负相关(r=-0.568、-0.743、-0.813,P<0.05).卡泊芬净浓度>1.0μg/mL时,△KpsF、Ku80菌株菌落直径分别和卡泊芬净浓度呈正相关(r=0.927、0.915,P<0.05),卡泊芬净浓度<1.0μg/mL时,△KpsF、Ku80菌株菌落直径分别和卡泊芬净浓度呈负相关(r=-0.929、-0.923,P<0.05).△KpsF、Ku80菌株菌落直径同伊曲康唑、两性霉素B浓度均呈负相关(P<0.05).结论 烟曲霉KpsF基因过表达会影响烟曲霉的生长,且该基因可能参与烟曲霉生长形成分隔过程.KpsF基因缺陷在含卡泊芬净培养基上存在矛盾生长现象,过表达菌株无此现象.