长链非编码RNA uc.412在肾脏纤维化中的表达及作用

目的 探讨长链非编码RNA uc.412(LncRNA uc.412)在肾脏纤维化中的作用及可能的作用机制.方法 将12只雄性C57B/6小鼠随机分为对照组和单侧输尿管结扎(UUO)组,各6只.UUO组小鼠行左侧单侧输尿管结扎手术使其梗阻,构建肾脏纤维化模型;对照组小鼠行输尿管钝性分离但未进行结扎.于术后14 d处死小鼠,分别收集两组小鼠的血液及肾脏组织标本,检测血肌酐、血尿素氮;Masson染色检测肾脏纤维化程度;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测肾组织内LncRNA uc.412、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、胶原蛋白1(COL1)基因表达水平;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测肾组织中COL1蛋白的表达.体外培养大鼠系膜细胞,以TGF-β1和siRNA处理细胞,应用qPCR法检测LncRNA uc.412表达,Western blot法检测细胞内α-SMA蛋白的表达.体外培养大鼠系膜细胞,以TGF-β1、Smad3磷酸化特异性抑制剂SIS3处理细胞,qPCR法检测LncRNA uc.412表达水平.结果 动物实验中,UUO组小鼠血肌酐和血尿素氮水平显著高于对照组[(135.6±4.1)μmol/L比(14.4±0.9)μmol/L,(23.4±2.2)mmol/L比(8.3±1.3)mmol/L](P<0.01),Masson染色显示UUO组纤维化改变明显.UUO组小鼠组织内LncRNA uc.412、α-SMA、TGF-β1、COL1的mRNA高于对照组[(13.07±3.78)比(1.05±0.30),(13.03±2.20)比(1.16±0.54),(14.87±5.18)比(1.20±0.77),(188.61±34.79)比(1.03±0.25)](P<0.05),且UUO组COL1蛋白表达量明显高于对照组[(2.629±0.045)比(0.969±0.003)](P<0.01).siRNA对TGF-β1诱导大鼠系膜细胞中,TGF-β1组LncRNA uc.412的表达高于对照组,TGF-β1+25 nmol/L siRNA组、TGF-β1+50 nmol/L siRNA组、TGF-β1+75 nmol/L siRNA组低于TGF-β1组(P<0.05);TGF-β1组α-SMA蛋白表达高于对照组,TGF-β1+siRNA组低于TGF-β1组(P<0.05).SIS3干预大鼠系膜细胞中,TGF-β1组LncRNA uc.412表达高于对照组,TGF-β1+SIS3组低于TGF-β1组P<0.05).结论 LncRNA uc.412表达水平升高参与UUO模型肾脏纤维化的发生.TGF-β1可能通过TGF-β1/Smad3信号通路诱导系膜细胞LncRNA uc.412的表达增加,进而引起肾脏纤维化的改变.