EPO干预后人脐带间充质干细胞对人肾小管上皮细胞纤维化及归巢能力的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)干预的人脐带间充质干细胞(HUMSCs)对人肾小管上皮细胞株(HK-2)纤维化过程的影响.方法 取HUMSCs和HK-2细胞,分别进行培养.采用Transwell实验和MTT法筛选EPO干预HUMSCs迁移和增殖的最佳浓度为100 IU/mL,采用RT-PCR法和Western blotting法筛选转化生长因子β1(TGF-β1)诱导HK-2细胞纤维化的最佳浓度为10μg/L.采用Transwell体系进行细胞共培养,将HK-2细胞分为4组,对照组:上室内为单纯培养基,下室内为HK-2细胞和培养基;TGF-β1组:上室内为单纯培养基,下室内为HK-2细胞加入含10μg/L TGF-β1的培养基;HUMSCs干预组:上室内为HUMSCs和培养基,下室内为HK-2细胞加入含10μg/L TGF-β1的培养基;EPO+HUMSCs干预组:上室内为HUMSCs加入含100 IU/mL EPO的培养基,下室内为HK-2细胞加入含10μg/L TGF-β1的培养基.培养72 h后,在显微镜下观察细胞的形态和生长情况,并计数穿膜细胞数.采用RT-PCR法检测HK-2细胞中纤维化因子TGF-β1、纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及归巢因子基质细胞衍生因子(SDF-1)及其受体CXCR4、干细胞因子(SCF)及其受体c-Kit mRNA的相对表达量,Western blotting法测定上述纤维化因子和归巢因子蛋白的相对表达量.结果 与对照组比较,TGF-β1组HK-2细胞失去了上皮细胞的形态,形成了具有迁移能力的上皮样细胞和肌成纤维细胞.与对照组比较,TGF-β1组、HUMSCs干预组、EPO+HUMSCs干预组细胞迁移数量均增加,EPO+HUMSCs干预组细胞迁移数量较HUMSCs干预组和TGF-β1组减少(P均<0.01).与对照组比较,TGF-β1组细胞TGF-β1、FN、ColⅣ、α-SMA、CXCR4、SDF-1、c-Kit、SCF mRNA及蛋白表达水平最高,HUMSCs干预组次之,EPO+HUMSCs干预组最低(P<0.05或<0.01).结论 EPO可促进HUMSCs的增殖和迁移,将HUMSCs定向迁移至受损的HK-2,抑制HK-2分化成具有迁徙能力的无功能的上皮样细胞,从而延缓肾小管上皮细胞的纤维化进展.