肽基精氨酸脱亚胺酶4在类风湿关节炎中的表达及意义

目的:分析类风湿关节炎(RA)患者肽基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)蛋白的表达水平与类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体及28个关节的疾病活动度评分(DAS28)的相关性,探讨PAD4对RA的诊断和治疗价值.方法:收集90例RA患者和76例健康对照者的血清,同时收集RA患者的临床资料,ELISA法检测PAD4的表达水平及RA患者血清中抗CCP抗体、RF-IgA、RF-IgG的表达水平.收集39例RA患者和22例健康对照者EDTA抗凝全血,采用淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞(PBMC),实时荧光定量PCR检测PAD4 mRNA的表达水平;特种蛋白仪检测89例RA患者血清中RF-IgM的水平.分离并培养RA患者PBMC,分别加入7.5、15、30、60μmol·L-1 PAD4抑制剂F-amidine,作用24、48及72 h后CCK-8检测PBMC增殖情况并确定最佳浓度和最佳作用时间;在最佳浓度和最佳作用时间时收集细胞采用流式细胞术检测PBMC细胞凋亡情况.结果:RA患者血清中PAD4的浓度为(5.94±0.37)ng·ml-1,显著高于健康对照者的(2.30±0.18)ng·ml-1,差异有统计学意义(P<0.05).PAD4诊断RA的ROC曲线下面积(AUC)为0.875.RA患者PAD4的表达水平与RF-IgM呈正相关(r=0.22,P=0.039),抗CCP抗体阳性组患者PAD4的表达水平与抗CCP抗体水平呈正相关(r=0.258,P=0.033),而抗CCP抗体阴性组患者血清中也会有高水平的PAD4表达;PAD4表达水平与RF-IgA、RF-IgG和DAS28无相关性.PAD4抑制剂F-amidine作用RA患者PBMC的最佳作用时间是48 h,最佳作用浓度是15μmol·L-1.F-amidine可以增加PBMC晚期凋亡比例.RA患者全血中PAD4 mRNA的表达水平为7.23±9.57,显著高于健康对照者的1.00±0.00,差异有统计学意义(P<0.05),同时PAD4 mRNA的表达水平与抗CCP抗体呈正相关(r=0.390,P=0.023),但与RF及DAS28无相关性.结论:RA患者PAD4的表达水平可作为诊断RA的一个指标,在抗CCP抗体阴性的RA患者中也有73.7％的表达PAD4,检测PAD4的水平对其诊断价值更高;PAD4可以作为治疗RA的一个靶点.