移植BMSC来源的Leydig样细胞对DEHP损伤小鼠睾丸功能的修复作用及其机制

目的 探讨移植骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的Leydig样细胞对邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯(DEHP)染毒小鼠睾丸功能的修复作用及其可能机制.方法 将6只C57小鼠随机分为DEHP组与对照组,进行DEHP染毒28 d后,获取小鼠血清行睾酮检测;同时获取睾丸组织行HE染色及TUNEL染色,并检测睾丸半胱氨酸蛋白酶(caspase)-3、caspase-8、caspase-9、Bcl-2和Bax蛋白变化情况,测定丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.同时,将27只C57小鼠进行DEHP染毒28 d,随机分为Leydig样细胞移植组、BMSC移植组及对照组(n=9),分别将BMSC来源的Leydig样细胞、BMSC移植到相应组别C57小鼠睾丸中,在移植后7、14、21 d时每组选取3只小鼠血液检测血清睾酮水平;同时获取双侧睾丸,检测睾丸组织MDA、GSH含量及SOD、GSH-Px活性.移植后7 d时获取小鼠睾丸行HE染色及TUNEL染色,同时检测caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bcl-2及Bax蛋白表达情况.结果 与对照组比较,DEHP组C57小鼠血清睾酮水平明显下降,睾丸生精细胞紊乱,组织细胞出现凋亡,凋亡蛋白caspase-3、caspase-8、caspase-9及Bax蛋白表达水平明显增高,Bcl-2蛋白表达水平明显降低,MDA含量升高,GSH含量降低,GSH-Px及SOD活性受到抑制,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01).行细胞移植后,与对照组比较,移植后7、14、21 d时Leydig样细胞移植组小鼠血清睾酮水平明显升高,移植后14、21 d时BMSC移植组血清睾酮水平明显升高,在移植后7、14、21 d,Leydig样细胞移植组及BMSC移植组睾丸组织MDA含量明显降低,GSH含量明显升高,GSH-Px及SOD活性恢复(P<0.05或P<0.01);移植后7 d,Leydig样细胞移植组及BMSC移植组睾丸组织细胞凋亡较对照组明显减轻,生精细胞形态有所恢复,同时caspase-3、caspase-8、caspase-9及Bax蛋白表达水平明显降低,而Bcl-2蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01).结论 移植BMSC来源的Leydig样细胞可通过减轻睾丸氧化应激反应及抑制睾丸组织凋亡的途径修复DEHP对小鼠睾丸的损伤,使睾酮分泌增加,从而促进受损睾丸功能的恢复.