微RNA-708-5p对结核性脑膜炎小鼠脑损伤的影响

目的 探讨微RNA(miR)-708-5p在结核性脑膜炎(TBM)小鼠脑损伤中的作用及机制.方法 将48只BALB/c小鼠随机分为假手术组、TBM组、TBM+miR-708-5 p inhibitor组及TBM+NC-inhibitor组,每组12只.TBM组、TBM+miR-708-5p inhibitor组及TBM+NC-inhibitor组小鼠经尾静脉注射0.2 mL结核分枝杆菌H37Rv菌悬液(2.5×109 CFU·L-1)制备TBM模型,假手术组小鼠给予等体积磷酸盐缓冲液.造模成功后,TBM+miR-708-5p inhibitor组、TBM+NC-inhibitor组小鼠分别经尾静脉注射0.2 mL miR-708-5p inhibitor(2 mg·kg-1)和NC-inhibitor(2mg·kg-1),每2 d注射1次,连续1周.将对数生长期小鼠脑膜细胞GIBH001根据转染载体的不同分为对照组、miR-708-5 p过表达组、补体C1 q肿瘤坏死因子相关蛋白1(C1 qtnf1)过表达组及miR-708-5 p+C1 qtnf1过表达组,分别转染NC-mimic和Vector、miR-708-5 p mimic和Vector、NC-mimic和pcDNA-C1 qtnf1、miR-708-5 p mimic和pcDNA-C1 qtnf1;另根据转染载体的不同,将GIBH001细胞分为空白组、NC-inhibitor组及miR-708-5 p inhibitor组,空白组细胞不做处理,NC-inhibitor组、miR-708-5 p inhibitor组细胞分别转染NC-inhibitor、miR-708-5 p inhibitor.采用干湿法检测各组小鼠脑组织含水量;采用伊文思蓝实验检测各组小鼠血脑屏障通透性;采用酶联免疫吸附法检测各组小鼠脑组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测小鼠脑组织中miR-708-5 p和C1 qtnf1 mRNA相对表达量以及各组GIBH001细胞中C1 qtnf1 mRNA相对表达量;采用Western blot法检测各组小鼠脑组织中和对照组、miR-708-5 p过表达组、C1 qtnf1过表达组、miR-708-5 p+C1 qtnf1过表达组GIBH001细胞中磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)蛋白相对表达量.结果 TBM组小鼠脑组织同侧基底神经节含水量显著高于假手术组(P<0.05);TBM+miR-708-5p inhibitor组小鼠脑组织同侧基底神经节含水量显著低于TBM+NC-inhibitor组(P<0.05);4组小鼠对侧皮质、对侧基底神经节、同侧皮质、小脑含水量比较差异均无统计学意义(P>0.05).TBM组小鼠血脑屏通透性显著高于假手术组(P<0.05);TBM+miR-708-5p inhibitor组小鼠血脑屏障通透性显著低于TBM+NC-inhibitor组(P<0.05).TBM组小鼠脑组织中TNF-α、IL-1β水平均高于假手术组(P<0.05);TBM+miR-708-5p inhibitor组小鼠脑组织中TNF-α、IL-1β水平显著低于TBM+NC-inhibitor组(P<0.05).与假手术组比较,TBM组小鼠脑组织中miR-708-5p的相对表达量显著升高(P<0.05),C1 qtnf1 mRNA相对表达量显著降低(P<0.05);与TBM+NC-inhibitor组比较,TBM+miR-708-5p inhibitor组小鼠脑组织中miR-708-5p的相对表达量显著降低(P<0.05),C1 qtnf1 mRNA相对表达量显著升高(P<0.05).miR-708-5p过表达组细胞中C1 qtnf1 mRNA相对表达量低于对照组(P<0.05);C1 qtnf1过表达组细胞中C1 qtnf1 mRNA相对表达量高于对照组(P<0.05);miR-708-5p+C1 qtnf1过表达组细胞中C1 qtnf1 mRNA相对表达量显著低于C1 qtnf1过表达组(P<0.05);miR-708-5p+C1 qtnf1过表达组细胞中C1 qtnf1 mRNA的相对表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).NC-inhibitor组细胞中C1 qtnf1 mRNA相对表达量与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);miR-708-5p inhibitor组细胞中C1 qtnf1 mRNA相对表达量显著低于空白组(P<0.05);miR-708-5p inhibitor组细胞中C1 qtnf1 mRNA相对表达量显著低于NC-inhibitor组(P<0.05).TBM组小鼠脑组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著高于假手术组(P<0.05);TBM+miR-708-5p inhibitor组小鼠脑组织中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt显著低于TBM+NC-inhibitor组(P<0.05).miR-708-5p过表达组细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著低于对照组(P<0.05);C1 qtnf1过表达组细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著高于对照组(P<0.05);miR-708-5 p+C1 qtnf1过表达组细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt均显著低于C1 qtnf1过表达组(P<0.05);miR-708-5p+C1 qtnf1过表达组细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 miR-708-5p可促进TBM小鼠脑损伤的发生,其机制可能与下调C1 qtnf1的表达、抑制PI3 K/Akt信号通路有关.