下调miR-4443/TIMP2信号通路增强HepG2细胞对索拉非尼的敏感性

目的 探讨下调miR-4443/TIMP2信号通路后肝癌HepG2细胞对索拉非尼敏感性的影响.方法 将HepG2细胞分为对照组(DMSO)与索拉非尼处理组(10 μmol/L),索拉非尼处理HepG2细胞24 h后,RT-qPCR检测miR-4443的变化;脂质体法将miR-4443模拟物与miR-4443抑制剂转染HepG2细胞,通过CCK-8检测转染miR-4443模拟物或抑制剂后联用索拉非尼对HepG2细胞活性的影响;生物信息学预测miR-4443的下游靶基因,索拉非尼处理24 h后通过RT-qPCR和Western blot分别检测下游靶基因TIMP2 mRNA及其蛋白水平的变化;转染miR-4443模拟物、抑制剂后,RT-qPCR和Western blot分别检测TIMP2 mRNA以及蛋白含量的变化;在HepG2细胞中通过脂质体法转染TIMP2 siRNA,Western blot检测TIMP2蛋白含量;CCK-8检测敲低TIMP2后联用索拉非尼对HepG2细胞活性的影响.结果 与对照组相比,索拉非尼处理组HepG2细胞中miR-4443的含量显著降低(P＜0.05);转染miR-4443模拟物可显著降低索拉非尼对细胞活性的抑制(P＜0.05),而转染其抑制剂则可显著增强索拉非尼的这一作用(P＜0.05);生物信息学预测结果显示miR-4443结合的下游靶基因为TIMP2;索拉非尼处理后HepG2细胞中TIMP2的mRNA及蛋白水平显著升高(P＜0.05);而在HepG2细胞中转染miR-4443的模拟物或抑制剂则可使TIMP2的mRNA表达量相应下降或上升,转染模拟物后TIMP2蛋白表达显著降低(P＜0.05),表明miR-4443 与TIMP2间存在调控关系;用TIMP2 siRNA降低TIMP2表达后,可显著增强索拉非尼对HepG2细胞活性的抑制效果(P＜0.05).结论 下调miR-4443/TIMP2信号通路可以增强HepG2细胞对索拉非尼的敏感性.