下调rpl15基因的表达抑制斑马鱼早期造血的发育

目的 探究核糖体蛋白L15(ribosomal protein 115,rpl15)基因表达下调对斑马鱼早期造血发育的影响.方法 设计并合成rpl15吗啉代反义寡核苷酸(morphilino antisense oligo,MO),通过显微注射到单细胞期斑马鱼(0～0.75 hpf)的受精卵中来下调rpl15的表达,通过qRT-PCR和Western blot技术验证下调rpl15基因表达的有效性.使用体式显微镜分别观察注射rpl15 MO(MO)组与野生型(WT)组的发育情况.O-dianisidine染色检测血红蛋白表达的情况,qRT-PCR检测红系特异性转录因子hbae3、hbbe1的表达变化.全胚原位杂交和qRT-PCR检测红系特异性转录因子gata1、髓系转录因子pu.1、粒系转录因子mpo、定向造血标志转录因子runx1和c-myb、原始祖细胞造血标志物scl和lmo2等早期造血发育过程的关键转录因子的表达变化.TUNEL实验检测造血组细胞的凋亡变化.结果 显微注射rpl15 MO能显著下调斑马鱼rpl15的表达,与WT组相比,MO组表现出体节弯曲、发育迟缓、心包水肿等异常表型.MO组血红蛋白合成量与hbae3、hbbe1的表达量相较于WT组明显减少(P＜0.05).原位杂交及qRT-PCR结果表明,gata1的表达明显减少(P＜0.05),pu.1、mpo、runx1、c-myb的表达无明显变化,scl的表达明显减少(P＜0.01),lmo2的表达无明显变化.TUNEL实验显示造血祖细胞的凋亡无明显变化.结论 下调rpl15的表达抑制了斑马鱼早期的造血发育,并可能与gata1和scl表达明显降低有关.