鹅不食草心菊内酯对肝星状细胞活化的抑制作用机制研究

目的 研究鹅不食草心菊内酯(helenalin)对LX-2人肝星状细胞(HSCs)活化的抑制作用及其机制.方法 用白细胞介素-1β(IL-1β)20 ng·mL-1刺激LX-2细胞建立体外细胞模型,另取未刺激细胞作为正常组.将损伤细胞分为5组:模型组、阳性对照组[LY294002(磷脂酰肌醇3激酶/丝苏氨酸蛋白激酶通路抑制剂)20μmol·L-1]和高、中、低3个剂量实验组(helenalin:2.0,1.0,0.5μmol·L-1),均干预24 h.用四甲基偶氮唑盐法检测细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量-PCR法检测微小RNA-21(miR-21)基因的表达,蛋白质印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原和Ⅲ型胶原蛋白的表达(光密度值).结果 Helenalin作用24 h时的IC50为6.98μmol·L-1,根据细胞的增殖抑制率,选择低于IC50的3个浓度(2.0,1.0,0.5μmol·L-1)作为后续实验的给药浓度.正常组、模型组和高、中、低3个剂量实验组的miR-21基因相对表达量分别为0.99±0.15,1.71±0.07,1.03±0.04,1.01±0.02和1.19±0.12;正常组、模型组、阳性对照组和高、中、低3个剂量实验组的总凋亡率分别为(1.45±0.33)％,(1.93±0.55)％,(23.33±0.49)％,(19.77±0.65)％,(10.70±0.75)％和(3.01±0.38)％;上述6组的 α-SMA蛋白相对表达量分别为0.19±0.02,0.26±0.04,0.15±0.02,0.15±0.02,0.18±0.04和0.20±0.04;上述6组的I型胶原蛋白相对表达量分别为0.15±0.02,0.39±0.05,0.19±0.01,0.24±0.04,0.37±0.04和0.38±0.06;上述6组的Ⅲ型胶原蛋白相对表达量分别为0.07±0.01,0.31±0.04,0.09±0.01,0.05±0.01,0.05±0.01和0.18±0.02.上述指标:模型组与正常组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01);3个剂量实验组与模型组相比,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01).结论 Helenalin抗肝纤维化的作用机制可能与抑制肝星状细胞的增殖活化、诱导细胞凋亡和减少活化细胞内胶原的合成并下调miR-21基因的表达有关.