miR-208a促进非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的功能和机制研究

目的 探讨miR-208a对非小细胞肺癌A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其机制.方法 (1)分别用miR-208a mimic、NC mimic、miR-208a inhibitor和NC inhibitor转染A549细胞.采用荧光定量PCR(qPCR)检测A549细胞中miR-208a过表达和干扰效率;采用CCK-8实验、Transwell实验和划痕实验检测miR-208a对A549细胞增殖、侵袭和迁移的影响.利用生物信息学网站PicTar、miRanda、Targetscan和miRDB预测与miR-208a结合的下游靶基因;构建蛋白酪氨酸磷酸酶受体G(PTPRG)的3′UTR野生型和突变型双荧光素报告酶基因载体,和miR-208a共转染到HEK-293T细胞后观察荧光素酶活性变化.(2)取对数生长期的A549细胞,设置阴性对照组(si-NC组)、PTPRG敲低组(si-PTPRG组)和PTPRG敲低组+miR-208a干扰组(si-PTPRG+miR-208a inhibitor组),采用CCK-8、Transwell实验和划痕实验检测PTPRG对A549增殖、侵袭和迁移的影响,qPCR和Western blot检测3组细胞PTPRG的mRNA和蛋白表达变化.结果 (1)miR-208a mimic组miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均高于NC mimic组(P<0.05);miR-208a inhibitor组的miR-208a基因表达水平、细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移率均低于NC inhibitor组(P<0.05).生物信息学分析显示PTPRG是miR-208a的靶基因,双荧光素报告酶实验结果 显示miR-208a过表达能够降低PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,而敲低miR-208a能够增加PTPRG 3′UTR野生型的荧光素酶活性,miR-208a能够与PTPRG的3′UTR序列结合.(2)与si-NC组相比,si-PTPRG组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力明显增高,PTPRG基因和蛋白表达水平下降(P<0.05);而与si-PTPRG组相比,si-PTPRG+miR-208a inhibitor组细胞增殖、细胞侵袭和细胞迁移能力下降,PTPRG基因和蛋白表达水平升高(P<0.05).结论 miR-208a可能通过靶向调控PTPRG来促进A549细胞的增殖、侵袭和迁移.