同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法检测血浆18-羟皮质酮方法的建立及初步临床应用

目的 建立一种同位素稀释超高效液相色谱串联质谱法(isotope dilution ultra performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,ID-UPLC-MS/MS)检测血浆18-羟皮质酮(18-Hydroxycorticosterone,18-OHB)的方法.方法 取血浆标本或标准溶液200μL置于离心管中,然后加入同位素氚标记的18-OHB为内标,用甲醇沉淀血浆蛋白,离心后取上清液,用Prime HLB Elution 96孔SPE板进行萃取,收集洗脱液,在正离子电喷雾离子化的多离子反应监测模式下检测18-OHB.评价该方法的精密度、加标回收率、定量检测下限、线性和基质效应.2019年11月起招募表观健康志愿者,采用ID-UPLC-MS/MS检测其血浆18-OHB水平,并验证梅奥医学实验中心提供的18-OHB参考区间.结果 该方法检测血浆18-OHB的分析时间约为3.0 min,检测低、中、高3个水平18-OHB的重复性变异系数和实验室内不精密度分别为2.2％～3.5％和3.7％～5.0％,平均加标回收率为98.1％～101.7％,定量检测下限为0.01μg/L,在0.1～10μg/L范围内线性良好(r>0.990),血浆基质效应为86.83％～119.00％.基于本研究建立的ID-UPLC-MS/MS方法,73名表观健康人群血浆18-OHB第2.5、97.5百分位数分别为0.01、0.60μg/L,其中66％(48/73)血浆18-OHB水平处于梅奥医学实验中心提供的参考范围外.结论 本研究建立了一种ID-UPLC-MS/MS测定血浆18-OHB的方法,该方法检测快速、结果准确可靠,性能满足临床需求.