外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势

目的:研究外周血自然杀伤(NK)细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势.方法:采集10份健康供血者的外周血,采用无血清培养法对NK细胞进行扩增培养,并分别在培养的第0天、第4天、第8天、第12天、第16天、第20天进行细胞观察及计数、细胞表型分析和杀伤活性检测,总结外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势.结果:外周血单个核细胞(PBMCs)经诱导培养2～3 d即出现细胞集落.随着培养时间的延长,NK细胞的数量逐渐增加,不同培养时间点(第4天、第8天、第12天、第16天和第20天)NK细胞的数量相比,P<0.05;NK细胞的杀伤活性从培养第8天开始升高,至第12天达到峰值后开始下降,不同培养时间点NK细胞的杀伤活性相比,P<0.05;NK细胞的比例先增加后下降(在培养至16 d达到峰值后开始下降),其比例的下降趋势较杀伤活性的下降趋势滞后,不同培养时间点NK细胞的比例相比,P<0.05;各时间点NK细胞的存活率均大于95％.结论:采用无血清培养法对外周血NK细胞进行培养时,随着培养时间的延长,外周血NK细胞的数量呈逐渐增加的趋势.外周血NK细胞的杀伤活性在培养12 d后出现下降的趋势.在培养的第12天～第16天,NK细胞的杀伤活性较强,细胞数量较多,细胞纯度较高.采用无血清培养法体外扩增NK细胞的效率较高.