基于GC-MS的绿僵菌代谢组学前处理技术研究

[目的]基于GC-MS技术对绿僵菌Metarhizium代谢物前处理技术进行优化,以期建立适用于绿僵菌的快速、准确的代谢组检测方法.[方法]优化绿僵菌代谢物的淬灭、提取、衍生和检测方法,测定方法的稳定性.[结果]40%(φ)冷乙醇溶液淬灭后核酸和蛋白回收率分别为9.63%和11.61%,淬灭效果优于其他淬灭剂;冷甲醇法可提取到代谢物109种,多于其他方法;衍生的时间越长,获得的代谢物越多,衍生1.5 h效果最好;气相色谱检测起始温度过高不利于代谢物的获得,50 ℃效果最好.最佳条件如下:40%(φ)冷乙醇溶液淬灭后用2 mL冷甲醇提取,离心后将上清液用N2吹干,加入20 mg/mL的甲氧基胺盐酸盐吡啶溶液80 μL,剧烈振荡30 s后,在37 ℃环境中反应90 min,反应结束后冷却至室温,然后加入含1%(φ)TMCS的BSTFA衍生剂80 μL,在70 ℃条件下反应,衍生1.5 h后冷却至室温.[结论]该方法简单、方便、重复性好.该方法的建立有助于开展更深入的代谢机制相关研究,为农、林领域开展病原微生物代谢组相关研究提供参考.