基于16型蓝舌病病毒重组核心样颗粒的阻断ELISA方法的建立

为建立基于蓝舌病病毒(BTV)重组核心样颗粒的阻断ELISA检测方法,采用16型BTV VP3和VP7装配的核心样颗粒作为包被抗原,利用制备的1株抗BTV VP7群特异性HRP标记的单克隆抗体,建立了检测BTV抗体的阻断ELISA方法.结果 显示,经优化反应条件,确定的抗原最佳包被浓度为16 μg/mL,抗原包被温度及时间为4℃过夜,被检血清稀释度为1∶10,酶标单抗稀释度为1∶4000,封闭液为1％ BSA,封闭液作用时间为90 min,被检血清作用时间为45 min,酶标单抗作用时间为30 min,底物作用时间为5 min.经阴阳性样品检测和特异性、敏感性试验,当临界值阻断率(PI)≥30.11％时判定为阳性,PI≤24.21％时判定为阴性,24.21％ ＜PI＜30.11％时判定为可疑.该方法与非洲马瘟病毒(AHSV)、鹿流行性出血热病毒(EHDV)、口蹄疫病毒(FMDV)、水泡性口炎病毒(VSV)阳性血清不发生交叉反应,敏感性较高.批内和批间精密性试验的变异系数(CV)均＜10％.与商品化ELISA试剂盒的对比检测表明,两者的符合率为97.8％.上述结果表明,建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性和敏感性,可用于BTV临床样品的抗体检测.