兔轮状病毒、兔肠冠状病毒双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

兔轮状病毒(lapine rotavirus,LaRV)和兔肠冠状病毒(rabbit enteric coronavirus,RECV)是引起兔腹泻的重要病原,2种病毒引起的仔兔腹泻症状极为相似.为建立能同时鉴别LaRV、RECV的方法,根据LaRV和RECV基因组的保守区段设计2对特异性引物,预期特异性扩增LaRV和RECV的片段大小分别为291 bp和163 bp,经优化反应条件,成功建立了 LaRV和RECV的双重RT-PCR检测方法.特异性检测结果显示,能特异性的扩增出LaRV和RECV的目的条带,与兔瘟、大肠杆菌、魏氏梭菌、沙门菌、泰泽菌、巴氏杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、链球菌、支气管败血波氏杆菌均无交叉反应;LaRV和RECV的最低检出限分别为2.73×105,1.22×104拷贝/μL,在相同条件下重复可获得一致的结果.对采自山东部分地区的107份兔腹泻样品的检测结果显示,LaRV和RECV的阳性率分别为10.28％和7.48％,两者与单一 RT-PCR检测结果相一致.结果表明,所建立的双重RT-PCR方法能够快速、准确的对LaRV和RECV单一或混合感染的样品进行检测,为LaRV和RECV的鉴别诊断和流行病学调查提供新的技术手段.