马疱疹病毒1型gp2基因缺失株的构建及生长特性分析

构建针对马疱疹病毒1型(equine herpesvirus-1,EHV-1)XJ2015株的转移载体pUC-gp2-LR和pUC-gp2-LR-EGFP;将EHV-1 XJ2015基因组与pUC-gp 2-LR-EGFP共转染至RK-13细胞,利用EGFP基因筛选获得EHV-1 XJ2015-gp2-/EGFP+毒株,以此毒株基因组与pUC-gp2-LR共转染至RK-13细胞,筛选去除EGFP基因的EHV-1 XJ2015-gp2-毒株并通过生长曲线、蚀斑形态、易感细胞连续传代评价其增殖能力和遗传稳定性.结合荧光观察、空斑纯化和PCR检测,获得能稳定遗传的EHV-1 XJ2015-gp2-,该毒株的生长曲线与亲本株存在差异,增殖能力下降约2个病毒滴度;两者的空斑面积平均值分别为0.378 mm2和1.698 mm2,差异极显著(P＜0.01).结果表明,成功获得EHV-1gp2基因缺失株,该毒株的体外生长动力学较亲本毒弱,为研制EHV-1减毒活疫苗奠定了基础.