牛呼吸道病毒多重PCR检测方法的建立及应用

为建立同时检测牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛副流感病毒3型(BPIV-3)这5种牛呼吸道病毒的方法,根据BVDV的5'UTR、IBRV的gB基因、BRSV的N基因、BCoV的N基因、BPIV3的HN基因序列设计特异性引物,建立了一种多重PCR检测方法.结果 显示,该方法对其他牛源病毒及细菌无特异性扩增,对BVDV、IBRV、BRSV、BCoV、BPIV3的最低检测限分别为103,103,104,103,104拷贝/μL.对采集自宁夏地区186份鼻拭子样本的检测结果显示,BVDV、IBRV、BRSV、BCoV、BPIV3阳性检出率分别为8.06％ (15/186),10.75％(20/186),15.05％(28/186),16.67％ (31/186),7.53％ (14/186),与单重PCR检测结果一致.结果 表明,本试验建立的多重PCR检测方法可用于牛呼吸道病毒的检测及流行病学调查.