穿膜肽与抗猪流行性腹泻病毒膜蛋白单域抗体融合表达和入胞活性分析

为获得能自主进入细胞的单域抗体(sdAb),将抗猪流行性腹泻病毒(PEDV)膜蛋白(M)的sdAb与一种细胞穿膜肽(TAT)融合表达,并纯化重组TAT-sdAb蛋白.用ELISA方法检测TAT-sdAb与M蛋白的结合活性,免疫荧光试验验证其穿Vero细胞膜活性、最适作用时间和剂量,并将TAT-sdAb与胞内PEDV进行共定位研究.结果证实,sdAb与TAT融合表达不影响其与M蛋白的结合活性,在使用剂量为50μg/mL、作用3 h时,能明显观察到其进入Vero细胞,并与胞内的PEDV呈现共定位分布.结果表明,融合TAT的sdAb具有抗原结合活性和穿膜活性,为基于单域抗体的药物研发提供了理论基础,为PEDV感染细胞的动态过程研究提供了可靠工具.