DHV-Ⅰ和DEV双重荧光定量PCR方法的建立

为建立快速特异的能够鉴别诊断DHV-Ⅰ和DEV的荧光定量PCR方法,根据NCBI中Ⅰ型鸭肝炎病毒和鸭肠炎病毒的保守序列,采用Beacon Designer 7.5软件,设计了2对特异性引物和2条用不同荧光基团标记的TaqMan探针.接着,对反应条件进行优化,验证其特异性及敏感性.结果,该方法特异性好,对鹅细小病毒、番鸭细小病毒、禽流感病毒、新城疫病毒、鸭坦布苏病毒、禽网状内皮增生病毒、禽呼肠弧病毒、减蛋综合征病毒、鸭甲肝病毒3型9种病毒检测,均无荧光信号.而且其灵敏度高,对DHV-Ⅰ和DEV的最小检出量均为200拷贝.利用所建立的荧光定量PCR方法对江苏徐州采集的166份肛拭子进行检测,检出Ⅰ型鸭肝炎病毒13份(阳性率为7.8％),鸭肠炎病毒75份(阳性率为45％).上述结果表明,本研究建立了灵敏度高特异性强的DHV-Ⅰ和DEV双重荧光定量PCR方法.