维氏气单胞菌脂蛋白Lpp/LppB双基因缺失株的构建与验证

在维氏气单胞菌单基因缺失株△Lpp的基础上,通过同源重组方法获得脂蛋白LppB基因上、下游同源臂连接片段,依次构建重组克隆载体pMD18-T-L-UD1225和重组自杀性载体Pre112-L-UD1225,随后转入WM3064感受态细胞中作为供体菌,与受体菌△Lpp进行结合转移,构建双基因缺失株△Lpp/LppB,通过反转录验证并检测其遗传稳定性.结果显示,成功构建了遗传稳定性良好的双基因缺失株△Lpp/LppB,其生长速率和生物被膜形成能力较野生株WT均下降.结果表明,协同缺失脂蛋白基因Lpp和LppB后,双基因缺失株△Lpp/LppB的生长和生物被膜变化更显著,这有利于进一步推测脂蛋白基因的功能,为之后研究维氏气单胞菌的致病机制奠定了基础.