柴胡皂苷对热诱导的奶牛乳腺上皮细胞抗氧化能力和热休克蛋白基因表达的影响

本试验旨在研究柴胡皂苷a(SSa)和柴胡皂苷d(SSd)对热诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)抗氧化能力和热休克蛋白基因表达的影响.以38℃培养的BMECs作为阴性对照组;高温42℃分别培养BMECs 1、4、8、12和24 h,建立热应激模型(阳性对照组);BMECs培养基中分别添加0.1、1.0μmol/L SSa和0.01、0.10μmol/L SSd,38℃培养4 h(SSa和SSd作用细胞时间)后,42℃分别处理1、4、8、12和24 h(处理组).测定各组BMECs中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH?Px)和过氧化氢酶(CAT)活性及培养液中丙二醛(MDA)含量,并检测细胞中热休克转录因子-1(HSF?1)和热休克蛋白70(HSP70)mRNA相对表达量.结果表明:与阴性对照组相比,阳性对照组BMECs中SOD和GSH?Px活性显著降低(P<0.05),培养液中MDA含量在热诱导4 h时显著升高(P<0.05),HSF?1和HSP70 mRNA相对表达量显著上调(P<0.05).与阳性对照组相比,任意浓度的SSa均能够显著提高热诱导1 h时BMECs中SOD活性(P<0.05);热诱导4、8和24 h时,0.1μmol/L SSa组BMECs中CAT活性显著提高(P<0.05);0.01μmol/L SSd在热诱导1、4、8、12和24 h时能显著提高BMECs中GSH?Px的活性(P<0.05);但在热诱导12和24 h时,1.0μmol/L SSa和0.1μmol/L SSd对BMECs中SOD、GSH?Px和CAT活性无显著改善作用(P>0.05),或者显著降低了以上抗氧化酶的活性(P<0.05),且在热诱导12 h时0.1μmol/L SSd组培养液中MDA含量显著升高(P<0.05),表明SSa和SSd对BMECs氧化应激的缓解作用存在剂量和时间依赖性.在热诱导1 h时,各处理组BMECs中HSP70 mRNA相对表达量较阳性对照组显著上调(P<0.05);在热诱导4 h时,0.1μmol/L SSa处理组BMECs中HSF?1和HSP70 mRNA相对表达量较阳性对照组显著上调(P<0.05);在热诱导12和24 h时,0.01μmol/L SSd处理组BMECs中HSP70 mRNA相对表达量较阳性对照组显著上调(P<0.05).综上所述,42℃热处理可诱导BMECs氧化应激,适宜浓度的SSa和SSd能够缓解热诱导BMECs的氧化应激,其中0.1μmol/L SSa和0.01μmol/L SSd对42℃热诱导条件下BMECs的氧化应激有较好的缓解作用,并可提高HSF?1和HSP70基因的表达,保护BMECs免受高温诱导的损伤.