反刍动物埃立克体荧光定量PCR检测技术的建立和应用
Acta Veterinaria Et Zootechnica Sinica（2021）
Abstract
为快速、准确地检测反刍动物埃立克体,本研究以反刍动物埃立克体pCS20为靶基因设计特异性引物和探针,建立了 TaqMan和Eva Green荧光定量PCR方法,对其反应的特异性、敏感性和重复性进行了分析,并与OIE推荐的套式PCR方法一起对临床样品进行检测.结果显示,本方法特异性强,与牛巴贝斯虫、牛双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、犬埃立克体、牛埃立克体、马埃立克体和立氏埃立克体无交叉反应;TaqMan和Eva Green荧光定量PCR对pCS20质粒标准品的最低检测限分别为17.4拷贝·μL-1和1.74拷贝·μL-1,标准曲线相关系数大于0.99,组内和组间CV均小于1.5％.对420只钝眼蜱样本的检测显示,TaqMan和Eva Green荧光定量PCR的检出率分别为25.48％和29.29％,与套式PCR检测方法相比,敏感性更高.本研究为反刍动物埃立克体的检测和流行病学调查提供了一种快速、准确的检测方法.
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