鸽圆环病毒SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR方法的建立及应用

为建立一种针对鸽圆环病毒(PiCV)的快速诊断方法,试验根据PiCV的Rep保守基因序列,设计合成一对特异性引物,建立了PiCV荧光定量PCR检测方法,对其敏感性、特异性、重复性进行评价并利用该方法对临床样本进行检测.结果表明:在最佳反应条件下,所建立的PiCV荧光定量PCR方法在1.43×102～1.43×108 copies/μL标准品范围内具有良好的线性相关性,线性相关系数为0.998;敏感性试验结果显示,该方法最低可检测到1.43×102 copies/μL标准品,是常规PCR检测方法的1000倍;特异性试验结果显示,该方法与其他常见的鸽病病原不发生交叉反应;重复性评价结果显示,批内与批间的变异系数均小于0.8％;所建立PiCV荧光定量PCR方法对临床鸽血清样品检测结果显示,PiCV阳性率达38.7％,高于常规PCR方法的检测阳性率(28.7％),说明该方法具有良好的适用性.研究结果PiCV的流行病学调查、病原学监测及定量研究奠定了基础.