检测猪瘟病毒E0抗体ELISA方法的建立与应用

E0蛋白是猪瘟病毒(CSFV)重要的结构蛋白之一,能刺激机体产生中和性保护抗体,同时也是作为鉴别诊断的标识之一.本研究通过RT-PCR扩增得到石门株E0基因,构建了重组质粒pET-28a-E0,原核表达E0目的蛋白后鉴定了其免疫反应性.将纯化后的目的蛋白进行梯度稀释,建立了 ELISA检测方法,优化反应条件如下:最佳蛋白包被浓度2 μg/mL,最佳一抗和二抗的稀释倍数分别为1:100及1:40 000,一抗孵育时间为30min,阴阳性临界值分别为0.293和0.418.结果显示组间与组内变异系数均小于10％,无交叉反应性,特异性良好.用建立的方法与商品化试剂盒同时检测206份临床免疫疫苗的血清样本,阳性和阴性及总体符合率分别为96.55％、84.21％及94.17％,表明ELISA方法具有良好的敏感性、稳定性和符合率,可用于临床样本的检测.用该方法检测了 85份免疫了 E2亚单位疫苗的临床猪血清样本,阳性率为10.59％,表明该方法可初步用于临床CSFV抗体的快速检测及鉴别诊断.