Cry1Ia蛋白N端信号肽对其蛋白表达量的影响

Cry1Ia是苏云金芽孢杆菌表达的分泌型Cry杀虫蛋白.为了研究Cry1Ia蛋白N端信号肽(Iasp)区域对其蛋白表达量的影响,梯度删除了N端氨基酸序列,将这些缺失突变体基因接入pET28aDel表达载体,并转化大肠杆菌BL21 Star(DE3)感受态细胞,得到一系列缺失突变体,即Cry1IaD5、Cry1IaD10、Cry1IaD13、Cry1IaD16、Cry1I-aD24、Cry1IaD32、Cry1IaD44和Cry1IaD73,分析其蛋白表达和mRNA热稳定性.结果显示,8种Cry1Ia蛋白突变体均成功表达,其中,Cry1IaD32和Cry1IaD44的表达量高于Cry1Ia,分别为Cry1Ia的1.43、1.12倍,Cry1IaD13和Cry1IaD16表达量与Cry1Ia基本持平,其余4种蛋白的表达量低于Cry1Ia;对mRNA起始密码子附近的核苷酸序列的二级结构进行预测发现,不同突变体该区域能够形成不同的茎环结构,且其热稳定性能具有一定的差异;进一步对蛋白相对表达量和mRNA结构热稳定性进行相关性分析表明,2个变量间无显著相关关系.研究结果可为揭示Iasp的功能奠定一定理论基础.