小麦TaBG的克隆及其在花药开裂中的潜在功能

[目的]β-葡萄糖苷酶(4-β-D-glueosidase,BG)是一种水解酶,可以从糖聚合物或寡聚糖中水解糖苷键释放出非还原性糖基,对控制花药开裂具有重要作用.小麦光温敏雄性不育系BS366在不育环境下花药不开裂,在可育环境下花药开裂或不完全开裂.从BS366中克隆TaBG,分析其在花药开裂中的潜在功能,为进一步解析小麦光温敏雄性不育系花药开裂异常的分子机理提供理论基础.[方法]以不育系BS366花药的cDNA为模板,克隆TaBG;利用生物信息学软件对TaBG及其蛋白结构进行预测,构建系统进化树、预测互作蛋白并对TaBG进行上游启动子元件以及互作miRNA预测;构建TaBG-16318hGFP载体,观察其在小麦原生质体中的亚细胞定位;使用实时荧光定量PCR (qPCR)方法测定TaBG在不育环境、可育环境下不同发育时期花药中的表达量,以及MeJA处理下TaBG及与其互作的ta e-miR395a在花药和颖壳中的表达模式.[结果]TaBG属于糖基水解酶超家族基因,全长为1473 bp,编码490个氨基酸,蛋白理论等电点为8.12,属于不稳定的亲水性蛋白.通过miRNA互作预测,发现TaBG可能受miR169、miR395a等抗逆性相关的miRNA调控.通过蛋白互作预测,发现TaBG可能与氧化还原酶(glucose-methanol-choline oxidoreductase,GMC)、内切葡聚糖酶(endoglucanase,EG)等蛋白互作.TaBG定位于小麦原生质体的液泡中.qPCR结果表明,TaBG在花药发育双室期(stage13)、花药开裂时期(stage14)和衰退期(stage15)中的表达量呈现先升高后下降的趋势.在花药开裂时期表达量最高,并且在不开裂花药中的表达量是正常开裂花药的2.8倍.经MeJA处理后,花药和颖壳中的TaBG均呈下调表达,taee-miR395a表达模式与其相反.[结论]TaBG可能受miR169、miR395a等抗逆相关miRNA的调控,参与花药开裂调控.由于TaBG表达量的升高,增加了不育环境下花药中可溶性糖的含量,进而增加花药中的渗透势,从而减缓花药开裂时的脱水活动,导致花药不开裂.