僵蚕碱溶性蛋白质的提取工艺优化及指纹图谱分析

建立稀碱法提取僵蚕蛋白质的最佳工艺,并对其进行相应SDS-PAGE(十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳)指纹图谱分析.单因素考察缓冲液pH值、液料比、提取时间和提取温度对僵蚕碱溶性蛋白质提取率的影响,随后以Box-Behnken组合设计响应面优化,对试验结果进行回归拟合分析,获得上述因素对碱溶性蛋白质提取率的量化关系,确定最佳提取条件,并对提取的碱溶性蛋白质进行SDS-PAGE指纹图谱分析.结果表明最佳提取工艺条件为:Tris-HCl(三羟甲基氨基甲烷盐酸盐)缓冲液pH值8.0、液料比58 mL:1 g,提取温度为40℃,提取时间为205 min,此时碱溶性蛋白质提取率可达2.29％.SDS-PAGE指纹图谱结果表明僵蚕碱溶性蛋白质含有29.85、27.28 ku 2条迁移率相近的高丰度特征性条带,分别占总蛋白量的36.37％、32.65％,同时还有78.8、69 ku较高丰度特征性条带,该指纹图谱具有种属特异性.本研究建立了僵蚕碱溶性蛋白质的最佳提取工艺条件,所得SDS-PAGE指纹图谱可为僵蚕药材的分子鉴定提供参考依据.