抗利巴韦林单链抗体基因构建及其结构分析

[目的]克隆构建利巴韦林(RBV)单链抗体(scFv)基因,对其理化特性进行分析并对蛋白质结构进行模拟,为后期检测方法的建立及分子改造提供参考依据.[方法]以分泌利巴韦林抗体的杂交瘤细胞株总RNA为模板,通过RT-PCR技术扩增抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL),然后以柔性连接短肽(Gly4Ser)3为接头拼接完整的scFv-RBV.利用生物信息学方法对scFv-RBV的理化性质及蛋白结构功能进行预测分析.[结果]构建的scFv基因编码240个氨基酸,相对分子质量为26162.27 Da,理论等电点(pI)为8.57.在二级结构中,β-折叠(39.17％)和无规卷曲(45.41％)占主导地位,α-螺旋(5.42％)和β-转角(10％)相对较少.在三级结构中,VH和VL区域被Linker相互牵拉靠近,形成典型的口袋样形状的空间构象,符合单链抗体的结构特征,理论上可以与RBV抗原特异性结合.[结论]成功构建scFv-RBV基因,并利用生物信息学方法预测分析scFv的二级、三级结构,该结果可为后期进行单链抗体的表达、纯化及定向进化提供理论支撑.