肺癌细胞微团的低温保存实验

细胞微团、细胞聚集体所构建的三维细胞模型在肿瘤研究领域中逐渐成为更合适的体外研究模型,但目前对于细胞微团的低温保存方法尚不完善.本文研究了A549肺癌细胞的接种密度以及培养天数对肺癌细胞微团尺寸及生长状态的影响,结果表明:接种密度为2×104个/mL,培养三天的肺癌细胞微团状态良好,可形成致密的结构,微团直径为344.24μm±0.74μm,最适用于低温保存.采用程序降温盒、程控降温仪两种慢速冷冻法低温保存肺癌细胞微团,复苏后细胞微团活力和增殖率远低于新鲜组;使用塑料麦管和玻璃毛细管快速或玻璃化保存肺癌细胞微团,当采用玻璃毛细管为冷冻载体,以含有20％EG+20％Me2 SO+0.5 mol/L海藻糖的DMEM作为低温保护剂时,复苏后细胞微团相对新鲜组活力为94.59％±9.23％,三天增殖率与新鲜组最为接近.最后,对冷冻载体的降温速率以及保护剂的临界降温速率进行测定,分析了细胞微团低温保存的热力学机理.