美洲锦鳚抗冻蛋白的表达与特性分析

[目的]构建美洲锦鳚抗冻蛋白低温表达体系,为探索寒冷损伤防治的新方法奠定理论基础.[方法]将含美洲锦鳚抗冻蛋白(AFP)基因的重组质粒转化E.coli BL21 (DE3),优化诱导条件,利用亲和层析对重组蛋白His-AFP进行分离纯化,对纯化的蛋白进行质谱(MALDI-TOF-TOF)鉴定.采用邻接法(Neigh-bor-joining)构建系统进化树,根据结构、机制、活性等性质比较分析鱼类抗冻蛋白特性.[结果]美洲锦鳚抗冻蛋白的低温最佳诱导温度为18℃,IPTG加入终浓度为0.1 mmol/L.质谱鉴定纯化的蛋白为美洲锦鳚抗冻蛋白.美洲锦鳚AFP与大西洋狼鱼(Anarhichas lupus)、大西洋鲱(Clupea harengus)、鳜鱼(Siniperca chuatsi)等的亲缘关系较近,而与其他鱼类的亲缘关系较远.[结论]研究成功构建了美洲锦鳚抗冻蛋白的低温表达系统,即最佳诱导温度为18℃,IPTG加入终浓度为0.1 mmol/L.