枣瘿蚊图尔病毒(DjTV-2a)PCR检测方法的建立

为了建立枣瘿蚊图尔病毒(DjTV-2a)的PCR检测方法,通过提取枣瘿蚊总基因组DNA和设计DiTV-2a特异性引物,以DNA模板(80,100,120 ng),引物浓度(0.7,0.8,0.9μmol·L-1),dNTP(0.2,0.3,0.4 mmol·L-1),Taq酶(1.25,1.35,1.45 U)为变量,采用正交设计筛选最佳PCR反应体系,建立与优化DjTV-2a的PCR检测方法.结果表明:正交设计的9组PCR反应体系均能够扩增和检测该病毒,且DNA模板100 ng,引物0.7μmol·L-1,dNTPs 0.4 mmol·L-1和Taq酶1.35U反应体系扩增效果最佳;对最佳PCR反应体系进行退火温度(46,48,50,52,54,56℃)优化,发现52℃为引物最佳退火温度.综上分析,在50μL反应体系下,引物退火温度为52℃,模板DNA量100 ng,引物0.7μmol·L-1,dNTPs 0.4 mmol·L-1,Taq酶1.35 U是DiTV-2a的最佳PCR扩增体系,可用于该病毒的检测.