褐飞虱酵母双杂交cDNA文库的构建及PIGM互作蛋白的筛选

目的:构建用于酵母双杂交的褐飞虱cDNA文库以及pGBKT7-NlPIGM诱饵载体,筛选与NlPIGM具有相互作用的蛋白.方法:以褐飞虱全虫mRNA为起始模板,采用CloneMiner构建褐飞虱cD-NA文库并通过涂布鉴定文库库容量和滴度,通过两步法构建pGBKT7-NlPIGM诱饵载体并鉴定重组诱饵载体的自激活活性及毒性,然后通过mating法筛选与NlPIGM具有相互作用的蛋白.结果:构建的初级cD-NA文库总库容为1.04×108 CFU,次级cDNA文库滴度为3.4×107 CFU/mL,重组率为100％,插入片段大小集中在750～2000 bp之间;pGBKT7-NlPIGM载体无自激活活性,对Y2H Gold酵母菌株无毒性.并筛选到9个能与NlPIGM互作的蛋白.结论:成功构建了可用于酵母双杂交的高质量褐飞虱cDNA文库及褐飞虱PIGM诱饵载体,并筛选到了能与N lPIGM互作的蛋白.