定向进化植物乳杆菌和痤疮丙酸杆菌高产共轭亚油酸

为获得高产共轭亚油酸(conjugated linoleic acid,CLA)的菌株,对亚油酸异构酶系植物乳杆菌的肌球蛋白交叉反应抗原(myosin-cross-reactive antigen,MCRA)基因mcra和痤疮丙酸杆菌的亚油酸异构酶基因lai-p进行克隆,克隆成功后连接到骨架质粒pCold-SUMO上构建两种含mcra基因和lai-p基因的大肠杆菌重组菌株,利用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷低温诱导阳性重组菌蛋白表达,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳验证得到目的 蛋白表达条带,说明两种基因表达成功.采用易错聚合酶链式反应定向进化mcra基因和lai-p基因,构建重组菌突变体库,利用流式细胞术分选获得吸光度提高和CLA产量提高的重组菌株,其中pCold-ycmcra-gfp重组菌243株,吸光度最高的为155号菌1.0506±0.0004,提高了5.02倍;pCold-yclai-p-gfp重组菌156株,产量最高的为39号菌(11.62±0.0036)μg/mL,提高了2.99倍.本研究为后期深入了解突变菌株CL产量提高的原因,并获得两种亚油酸异构酶的产酶机制奠定了一定基础.