一步离子交换层析从Cohn组分V上清液中分离人血清白蛋白

传统的血浆低温乙醇沉淀工艺中Cohn组分V上清液由于其乙醇浓度高(体积浓度40％),进一步回收残余蛋白困难而被作为废弃组分.本研究探索了采用一步层析从Cohn组分V上清中回收入血清白蛋白的方法.首先以牛血清白蛋白(BSA)为模型蛋白,比较了三种不同类型介质在不同乙醇-水溶液中的吸附容量.疏水介质在乙醇-水溶液中对BSA吸附能力很弱,增加乙醇浓度导致吸附量趋近于零;阳离子交换介质在低乙醇浓度下有较高的吸附量,但随乙醇体积浓度增高下降较大.相比之下阴离子交换介质展示了最好的吸附性能,在乙醇体积浓度40％的乙醇-水溶液中吸附容量仍达34.66mg/mL.进一步实验表明,在乙醇存在下BSA在阴离子交换介质上的吸附可用Langmuir等温吸附方程描述.将阴离子交换介质DEAE Sepharose Fast Flow装填层析柱,用于从Cohn组分V上清液中分离人血清白蛋白,将40％乙醇的Cohn组分V上清液直接进料阴离子交换层析柱,采用两步洗脱策略,第一步改变pH值由7.0到4.5以洗脱目标产物人血清白蛋白,第二步将氯化钠浓度从0增加到1 mol/L以洗脱紧密结合的部分酸性糖蛋白.SDS-PAGE电泳检测人血清白蛋白纯度为96.35％,得率为43 mg/L Cohn组分V上清液.圆二色谱和荧光光谱检测表明经过离子交换回收的白蛋白二级结构和三级结构与对照的医疗制品无明显差异.活性分析表明回收的白蛋白与配体华法令钠的结合常数与对照的医疗制品的结合常数相似.本研究表明,离子交换层析可用于从含乙醇的溶液中分离蛋白质,一步离子交换层析就可从血浆工业废弃液中回收高纯度的人血清白蛋白.