马铃薯多酚氧化酶的分离纯化、酶学性质及酶促合成茶黄素性能研究

茶黄素(theaflavins,TFs)是影响红茶品质的关键成分,在医药、保健、食品、美容等领域有着广泛的应用前景,但红茶中TFs含量极低且提取困难,因此添加外源多酚氧化酶(polyphenol oxidase,PPO)酶促合成TFs成为工业化生产的关键途径.以马铃薯为外源PPO供体,经过磷酸缓冲液浸提、硫酸铵沉淀和DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换层析分离纯化出马铃薯PPO,并进一步研究其酶学性质和酶促合成TFs的性能.试验结果表明:马铃薯PPO的比活力为21.79 U/mg,相对分子质量约为42 kDa,最适pH和温度分别为6.0和30℃,添加金属离子Al3+、Mg2+和Zn2+对其酶活力有激活作用,Cu2+和Mn2+有抑制作用,Na+、K+和Ca2+无明显作用;马铃薯PPO粗酶和纯酶均可酶促合成TFs,其最大生成量分别是(0.0961±0.0005)和(0.2378±0.0132)g/L,转化率分别为(9.24±0.05)％和(22.86±1.27)％.综上,马铃薯PPO可以作为外源PPO酶促合成TFs,且PPO纯酶比粗酶更具催化效果.