金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品的研制

目的 研制金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品.方法 将10株金黄色葡萄球菌和10株阴性对照代表性菌株分别在适宜条件下复苏培养,制备合适浓度的菌悬液,并加热灭活和分装.随机抽样不同候选参考品样品10支进行均匀性分析,并将样品分别置于2～8、25、37℃条件下保藏以及反复冻融,评价标准物质的稳定性.同时对候选参考品的准确性、特异性、重复性、最低检出限进行分析,并组织8家实验室进行协作标定.结果 制备了由阳性、阴性、重复性和最低检出限样品组成的金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用候选参考品.不同候选参考品不同样品间的Ct值的变异系数在1.23％～3.86％之间,表明制备候选参考品均匀性良好.同时证实P1～10阳性和最低检出限候选参考品样品在反复冻融及加速破坏条件下稳定性良好.应用3个不同厂家生产试剂盒进行重复性验证实验显示,样本的Ct值均小于5.0％,表明候选参考品的重复性良好.除P6阳性候选参考品样品不能被部分试剂盒检出,其余阳性参考品样品均能成功检测、最低检出限为1.0×103个/mL.协作标定结果进一步表明阳性、阴性、重复性和最低检出限候选参考品均符合国家参考品的各项要求.结论 研制的金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒用国家参考品已获得批准,可用于金黄色葡萄球菌核酸检测试剂盒的质量控制和评价.