荧光重组酶介导等温扩增快速检测食品中克罗诺杆菌属

目的 建立快速简便的荧光重组酶介导等温扩增法(recombinase-aided amplification,RAA)检测克罗诺杆菌属,以满足口岸快速通关及监管需要.方法 根据克罗诺杆菌属ompA基因保守区设计特异性引物、探针,通过引物两两组合结合探针筛选出扩增效率及灵敏度最佳的引物组合,优化反应温度及引物探针浓度,确定最佳反应条件.将建立的荧光RAA法应用于食品基质及实际样品检测,同时与GB 4789.40—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验》进行比对验证.结果 克罗诺杆菌属荧光RAA最佳反应温度为39℃,最佳引物、探针终浓度均为400 nmol/L.建立的荧光RAA法特异性强,纯菌灵敏度达到102 CFU/mL.加标食品基质婴儿奶粉及婴儿米粉在改良月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤-万古霉素(modified lauryl sulfate tryptose broth-vancomycin medium,mLST-Vm)增菌只需2 h,即可检测原始浓度达到10-2 CFU/mL的克罗诺杆菌属.荧光RAA法只需20～30 min完成扩增,5 min即可观察结果,速度及灵敏度明显高于国家标准方法.结论 荧光RAA法简便、快速、无需大型仪器,可用于口岸或其他场所进行克罗诺杆菌属的快速检测与监控.