黄精水提物干预脂多糖诱导的巨噬细胞极化与自噬研究

目的 探讨黄精水提物(Polygonatum sibiricum aqueous extract,PSAE)对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的RAW264.7巨噬细胞M1极化与自噬的调节作用,探究其抗炎机制.方法 实验分为对照组(无任何处理)、LPS组(100 ng/mL LPS刺激12 h)、PSAE低、中、高剂量组(50、100、200μg/mL PSAE预处理细胞4 h后,再加入100 ng/mL LPS刺激12 h).细胞计数(cell counting kit-8,CCK-8)法检测细胞活性;Griess法检测细胞NO分泌量;实时荧光定量PCR检测细胞诱导型NO合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)的mRNA水平;蛋白质免疫印迹和免疫荧光法检测M1型极化标志物iNOS表达水平;蛋白质免疫印迹检测微管相关蛋白1轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3,LC3)和螯合体1(sequestosome 1,p62)表达水平.结果 与LPS组相比,PSAE可使RAW264.7细胞NO的分泌减少(P<0.05,P<0.01),PSAE也可降低M1极化相关炎症因子(iNOS、IL-1β、TNF-α、MCP-1)mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01,P<0.001),降低M1极化标志物iNOS蛋白表达水平(P<0.05,P<0.001),同时,PSAE可降低LC3II/I值(P<0.01,P<0.001),促进p62蛋白表达(P<0.01),从而降低自噬水平.结论 PSAE能够抑制LPS诱导的RAW264.7细胞M1极化和自噬水平,减轻细胞炎症反应.