社区获得性致下肢气性坏疽ST660型肺炎克雷伯菌全基因组测序及毒力特征分析

目的:对1株致下肢气性坏疽肺炎克雷伯菌（KPN）进行全基因组测序及毒力特性分析，为认识致社区获得性重症感染KPN分子毒力特征提供参考。方法:患者于2018年3月13日进入急诊科治疗，主要临床症状为高热、左下肢气性坏疽及糖尿病酮症酸中毒。取患者脓液标本进行分离培养、菌株鉴定、高黏表型及药敏检测。对菌株进行全基因组测序并分析其多位点序列分型、荚膜分型、质粒分型、毒力及耐药基因。通过接合及消除试验分析质粒特征。血清杀菌试验及大蜡螟感染模型分析菌株毒力表型，双样本 t检验比较待测菌株和对照菌株对大蜡螟幼虫半数致死率（LD 50）差异。 结果:检出菌株KPN41053，仅对氨苄西林耐药，高黏表型阴性。KPN41053染色体总长5 377 071 bp，属于ST660型，荚膜型为K16；携带一个IncFIB（K）/HI1B型毒力质粒（207 506 bp），质粒包含多种毒力因子且序列与pLVPK高度相似，但其中rmpA和rmpA2均为假基因。该质粒接合试验阴性。通过质粒消除获得变异株KPN41053_PC。毒力表型分析显示，KPN41053为血清抗性（6级），而KPN41053_PC为血清中度敏感（3级），KPN41053对大蜡螟幼虫的lgLD 50与高毒力对照株（ST23-K1型）差异无统计学意义（ t=0.32， P=0.765），低于KPN41053_PC（ t=5.97， P=0.004）。 结论:KPN41053为1株属于ST660型且高黏表型阴性的非典型高毒力KPN，毒力质粒为其关键毒力因子。KPN可导致糖尿病患者发生社区获得性气性坏疽。