崇明拟异小杆线虫fak基因的功能鉴定

[目的]黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)作为多种信号传导的关键分子,在调节秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)的生长发育方面至关重要,直接影响其生存.本研究以小杆科(Rhabditidae)昆虫病原线虫(entomopathogenic nematode,EPN)崇明拟异小杆线虫(Heterorhabditidoides chongmingensis)的模式品系DZ0503CMFT(DZ)为研究对象,鉴定fak的生物学功能,探究其对DZ线虫生长发育的影响.[方法]在DZ线虫数字基因表达谱(digital gene expression profile,DGE)文库中,获取fak基因的编码序列.利用饲喂法将fak的dsRNA导入DZ线虫体内进行RNA干扰(RNA interference,RNAi),从而降低线虫体内fak基因的表达量.利用荧光定量PCR技术检测RNAi效果,对fak RNAi后的线虫进行生长发育分析,检测其在侵染力、体长、寿命、繁殖、生长阶段等方面的差异性.[结果]与L4440对照组线虫相比,fak RNAi组线虫的基因表达水平显著降低,下调39％.同一时间相同浓度的RNAi组线虫对大蜡螟的侵染力较对照组低.RNAi组线虫的平均寿命为16.8 d,比对照组降低21.5％.RNAi组线虫的孵化率为77.9％,比对照组下降15.8％.RNAi组雌虫的体长较对照组短,在培养7 d时为2114.83μm,比对照组下降11.9％.RNAi组线虫在生长的第Ⅰ—Ⅲ阶段所需的时间均较对照组短.与对照组线虫相比,培养12 d的RNAi组线虫对外界的刺激更加敏感.RNAi组与对照组在产卵量和雌虫率方面没有明显差异.[结论]通过RNAi的方法初步验证了fak基因在DZ线虫中的生物学功能,该基因在调控崇明拟异小杆线虫的生长发育方面具有重要作用.