HPLC法测定大黄碳酸钠片中非法成分土大黄苷的含量及UPLC-MS/MS确证

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)测定大黄碳酸钠片的组方药材大黄伪品中指标性成分土大黄苷的含量,并建立超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)确证方法.方法 HPLC法采用色谱柱为CAPCELL PAK MGⅡ(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈-水(20:80),检测波长为325 nm,流速为1.0 mL·min-1,进样量为10μL.UPLC-MS/MS确证方法采用色谱柱为Agilent Zorbax Eclipse Plus C18(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为0.1％甲酸水溶液-乙腈(80:20),流速为0.2 mL·min-1,柱温为40℃,进样量为2μL;采用电喷雾离子源(ESI)在负离子模式下,利用多反应监测(MRM)模式对土大黄苷进行分析,定量及定性离子对分别为m/z 418.9→257.1和m/z 418.9→160.9.结果 HPLC法方法学考察结果显示,土大黄苷在0.59～23.56μg·mL-1质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9997),检出限为0.06μg·mL-1,平均加样回收率为100.3％(n=9,RSD=1.5％).12个批次的大黄碳酸氢片中均未检出土大黄苷成分.UPLC-MS/MS法检测结果显示,土大黄苷在0.024～1.178μg·mL-1质量浓度范围内与峰面积线性关系良好(r=0.9996),检出限为0.7 ng·mL-1,平均加样回收率为99.4％(n=9,RSD=1.5％).12个批次的大黄碳酸氢片中均未检出质荷比(m/z)418.9的准分子离子峰和m/z 257.1、160.9的碎片离子峰.结论 所建立的HPLC法与UPLC-MS/MS法操作简便、快速灵敏,结果准确,可作为大黄碳酸钠片中非法成分土大黄苷的质量控制方法.