两种方法分离山羊骨髓间充质干细胞生长增殖能力的比较

目的:比较percoll密度梯度离心法和全骨髓培养法体外培养山羊骨髓间充质干细胞(goat bone marrow-derived mesenchymal stem cells,gBMSCs)的纯度并评估其生物学特性,为后期实验摸清实验条件并提供大量细胞源.方法:无菌收取3～5月龄山羊股骨骨髓组织,分别采用percoll密度梯度离心法和全骨髓培养法体外分离gBMSCs,相差显微镜下每日观察细胞形态;取生长良好的P3代细胞,绘制细胞生长曲线;成纤维细胞集落形成单位(colony forming unit-fibroblast,CFU-F)实验检测其自我更新能力;流式细胞术检测细胞表面标志物表达.结果:两组中原代及传代细胞均呈漩涡状排列生长,两种分离方法获得的P3代细胞"S"形生长曲线形态相似,全骨髓培养法分离的细胞在成纤维细胞集落形成能力中表现出更高的自我更新能力,流式细胞术结果显示两者表面标志表达相似,其中CD34、CD44均呈阳性表达,而CD45呈阴性.结论:无论是密度梯度离心法还是全骨髓培养法,均可得到形态均一、具有自我更新潜力的gBMSCs.但原代培养过程中密度梯度离心法提取的细胞增殖速度慢,到P3代时除细胞自我更新能力外其余细胞生物学特性无明显差异.