流式细胞术检测精子DNA损伤的标准化与质量控制初步研究

目的:对流式细胞术检测精子DNA损伤的标准化和质量控制进行初步研究.方法:随机选取精液样本,观察酸变性时间,吖啶橙(AO)染色时间,精液样本冷藏、冷冻及反复冻融对精子DNA碎片指数(DFI)结果的影响.结果:随着酸变性时间延长,精子DFI逐渐增高,与酸变性30 s相比,酸变性至2 min时DFI即显著增加(P＜0.05).AO染色5、20、40、60、100、140min后的精子DFI结果没有显著差异.精液样本于2～8℃冷藏后,精子DFI随冷藏时间延长显著增加,冷藏2 d后精子DFI即明显增加.精液样本可以直接于-20℃冷冻保存,且反复冻融3次对精子DFI结果影响不大,但DFI检测结果不够稳定.精液样本分装后冷冻,间隔1 d检测1次,共1个月,以此数据模拟室内质控,所得CV值为7.13％.结论:DFI检测中,确保酸变性时间的准确非常重要,最长不能超过1 min.染色时间或染色后放置时间对精子DFI结果没有显著影响.精子DFI检测最好为新鲜精液样本,如需冷藏,不能超过1 d.直接冷冻精液样本可以作为精子DFI检测的室内质控品.冷冻保护剂能否使冷冻精液样本更为稳定、室间质控品如何制备和运输将是未来要解决的关键问题.