基于NLRP3炎性小体探讨金铁锁提取物对类风湿性关节炎治疗机制的研究

该研究在中医药理论指导下,探究云南临床长期使用治疗风湿痹证的金铁锁的科学依据.考虑到现代医学类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)与风湿痹证在症状方面有较高相似度,基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(Nod-like receptor protein 3,NLRP3),考察金铁锁提取物(crude extract of Psammosilene tunicoides,CEPT)治疗RA的作用机制.采用胶原诱导类风湿性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠模型,于首次免疫第32天,按关节炎评分,随机将小鼠分组,每组10只,给药;按各组给药剂量,连续给药21 d.给药过程中每间隔4d,评价小鼠关节肿胀度、关节炎评分;测定小鼠脾脏指数,并对小鼠踝关节进行组织病理学检查;测定小鼠血清中白细胞介素1β(IL-1β)及白细胞介素18(IL-18)的含量;蛋白印迹(Western blot)法测定小鼠躁关节中NLRP3蛋白、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶1蛋白(cystein asparate protease1,caspase-1)、CARD结构域凋亡相关颗粒样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC)的表达;实时荧光定量核酸扩增(real-time quantitative PCR,q-PCR)检测NLRP3、caspase-1 mRNA的表达.结果 显示,与模型组小鼠相比,阳性药物(甲氨蝶呤)组,金铁锁提取物低、高剂量组小鼠血清中IL-1β、IL-18炎性因子的含量及脾脏指数均显著降低(P＜0.01);关节炎评分、发病关节肿胀程度均显著下降(P＜0.01);膝关节炎性浸润有所改善;踝关节中NLRP3、ASC、caspase-1蛋白及mRNA的表达水平均显著降低(P＜0.01).实验结果提示金铁锁可能通过抑制NLRP3炎性小体的表达,从而降低CIA小鼠足肿胀度及关节炎评分,降低炎症反应,为金铁锁在RA疾病中免疫调节的研究提供一定的实验基础及理论依据.