二仙汤对过氧化氢诱导的成骨细胞蛋白组学及PI3K信号通路的影响

采用过氧化氢(H2O2)复制细胞氧化应激模型,探讨二仙汤对过氧化氢(H2O2)刺激的成骨细胞蛋白组学的影响及其保护机制.取新出生(24 h以内)乳鼠的头盖骨培养原代成骨细胞,实验分为正常组、模型组、福善美组、二仙汤组4组,空白组和模型组加入空白血清,福善美组和二仙汤组则分别加入福善美含药血清和二仙汤含药血清干预45 h后,除正常组外,各组均加入H2O2刺激3h后,提取细胞蛋白,采用Nano-LC-LTQ-Orbitrap系统检测,Protein Discovery软件进行蛋白鉴定,SIEVE软件进行相对定量定性分析;另外用LY294002(10 μmol· L-1)阻断PI3K信号通路,实验分为空白对照组、模型组、LY294002组、二仙汤组、二仙汤+ LY294002组,观察LY294002干预下二仙汤含药血清对H2O2刺激成骨细胞后细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性及BMP-2、OPG、p-Akt、p-FoxO1蛋白表达的影响.结果 显示,二仙汤组与模型组比较共发现78个差异蛋白,这些蛋白参与PI3K/Akt、胰高血糖素、雌激素、胰岛素等信号通路的调节;使用LY294002后,二仙汤对成骨细胞增殖的促进作用被削弱,OPG、p-FoxO1表达显著下调,BMP-2、p-Akt表达有下调趋势但无显著性,然而LY294002和二仙汤均提高了成骨细胞ALP活力,这可能与细胞状态、细胞分化进程有关.以上结果表明,二仙汤含药血清对H2O2刺激的成骨细胞有保护作用,PI3K/Akt信号通路是内在机制之一.