茶藨子叶状层菌中核苷类成分的UPLC-Q-TOF-MS定性分析和HPLC含量测定

茶藨子叶状层菌为锈革孔菌科真菌茶藨子叶状层菌Phylloporia ribis寄生在忍冬科植物忍冬Lonicera japonica茎基部的干燥子实体,具有多方面的活性,但其药效物质基础迄今尚不完全明确,质量控制和评价鲜有报道.该文采用UPLC-Q-TOF-MS定性分析茶藨子叶状层菌中的核苷类成分,并建立HPLC同步测定10种核苷类成分的含量.在正离子模式下,采集一级和二级质谱数据,通过与对照品进行比对,并结合相关文献和ChemSpider,PubChem等化合物数据库,首次从茶藨子叶状层菌水提物中定性鉴别出18种核苷类成分.通过HPLC条件优化,确定以Welch Ultimate AQ C18(4.6 mmx250 mm,5 μm)为色谱柱,乙腈和水为流动相进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min-1,检测波长260 nm,柱温30℃.通过提取方法、提取溶剂和提取时间的考察,确定供试品溶液的制备方法为以水为溶媒冷浸提取18 h.在当前HPLC条件下,尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、肌苷、鸟苷、2'-脱氧肌苷、2'-脱氧鸟苷和胸苷等10种成分的分离度良好(R＞1.5),分别在质量浓度0.247～24.7、0.283～28.3、0.273～27.3、0.256～25.6、0.257～25.7、0.318～31.8、0.245～24.5、0.267～26.7、0.250～25.0、0.267～26.7 mg·L-1呈良好的线性关系(r＞0.999 9),平均回收率为95.78％～104.5％,RSD为2.2％～5.2％(n=6).茶藨子叶状层菌不同样品中10种核苷类成分的含量差别较大,尿嘧啶、胞苷、次黄嘌呤、尿苷、胸腺嘧啶、肌苷、鸟苷、2'-脱氧肌苷、2'-脱氧鸟苷、胸苷和10种核苷总质量分数分别为 0.021～0.122、0.004～0.029、0.014～0.226、0.009～0.442、0.003～0.014、0.002～0.146、0.007～0.098、0～0.054、0.005～0.069、0.004～0.081、0.072～1.28 mg·g-1,说明其内在质量存在较大差异,需要良好的质量控制才能保障其功效.该研究为茶藨子叶状层菌的药效物质发现、质量控制和评价提供科学依据.