miR-27a过表达的血管内皮细胞来源外泌体改善股骨头坏死实验研究

目的 探究miR-27a过表达的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)来源外泌体exo(miR-27a)能否促进骨再生并改善糖皮质激素(glucocorticoids,GC)诱导的股骨头坏死(osteonecrosis of femoral head,ONFH)(GC-ONFH).方法 构建exo(miR-27a),并通过透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、Western blot 和实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,qRT-PCR)进行鉴定.采用qRT-PCR评估exo(miR-27a)递送miR-27a至成骨细胞MC3T3-E1的效果,ALP染色、茜素红染色及qRT-PCR评估其对MC3T3-E1细胞成骨的影响.行双荧光素酶报告基因检测验证miR-27a靶向DickkopfWNT信号通路抑制剂2(DickkopfWNT signaling pathway inhibitor 2,DKK2)是否为潜在机制,并在MC3T3-E1 细胞内通过qRT-PCR、Western blot及茜素红染色进一步验证该机制.最后,通过SD大鼠的GC-ONFH模型验证exo(miR-27a)对ONFH的保护作用.结果 透射电镜、纳米颗粒跟踪分析、Western blot和qRT-PCR检测示exo(miR-27a)构建成功.exo(miR-27a)可将miR-27a有效递送至MC3T3-E1细胞并提高其成骨能力.双荧光素酶报告基因检测示miR-27a通过直接靶向DDK2促进成骨.动物实验Micro-CT及HE染色结果显示,尾静脉注射exo(miR-27a)改善了SD大鼠GC-ONFH模型的骨坏死情况.结论 exo(miR-27a)可以促进骨再生,并在一定程度上改善GC-ONFH.