锌指蛋白A20对兔腰椎间盘退变影响的实验研究

目的 探讨锌指蛋白A20对兔腰椎间盘退变的影响.方法 取3月龄新西兰大白兔26只,体质量2.0～2.5 kg,经腹细针穿刺法制备L3、4、L4、5、L5、6椎间盘退变模型,其中24只术后4周MRI检查明确造模成功,随机分为4组(n=6),于目标椎间盘中分别注射锌指蛋白A20过表达腺病毒(过表达A20组)、空载体腺病毒(空载体组)、PBS液(对照组)、锌指蛋白A20干扰腺病毒(干扰A20组).于注射前1d及注射后1、2、3、6 d行生物反应综合评分;注射后2、4、8周,各组行MRI检查并测量T2弛豫时间(T2信号值)后,取材行阿利辛蓝染色观察椎间盘髓核细胞退变情况,免疫组织化学染色检测锌指蛋白A20以及椎间盘退变相关指标(Ⅱ型胶原、蛋白聚糖)的表达,Western blot检测锌指蛋白A20、NF-κB结合蛋白[P65、磷酸化P65(phosphate P65,P-P65)、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖]、自噬相关蛋白[LC3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)、P62]以及炎症因子(TNF-α、IL-1β)的表达.结果 各组注射后各时间点生物反应综合评分均明显低于注射前1 d(P＜0.05);注射后6d干扰A20组评分明显低于其他组(P＜0.05),其他组间比较差异均无统计学意义(P＞0.05).MRI检测提示,注射后2、4、8周过表达A20组T2信号值均最高(P＜0.05),2、4周时干扰A20组最低(P＜0.05),其余组间差异均无统计学意义(P＞0.05).阿利辛蓝染色显示,注射后4周过表达A20组蛋白聚糖含量最高(P＜0.05)、干扰A20组最低(P＜0.05);8周时过表达A20组蛋白聚糖含量显著高于其他组(P＜0.05),其他组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学染色示,锌指蛋白A20、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖表达过表达A20组最高(P＜0.05),干扰A20组上述蛋白表达最低(P＜0.05).Western blot检测示锌指蛋白A20、蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、LC3(LC3Ⅱ/LC3Ⅰ)蛋白相对表达量过表达A20组最高、干扰A20组最低,而P-P65、TNF-α、IL-1β、P62蛋白相对表达量过表达A20组最低、干扰A20组最高,与其他组比较差异均有统计学意义(P＜0.05);各组P65蛋白相对表达量差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 锌指蛋白A20能通过抑制炎症反应,有效延缓兔腰椎间盘退变的进程.